尊龙凯时人前列腺癌细胞VCAP培养指南

一、细胞培养条件

确保细胞在适宜的环境中生长，使用37℃、5% CO2培养箱进行细胞培养，以维持细胞的最佳生长状态。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒。随后，将细胞瓶放入超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱静置3-4小时，使细胞稳定后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞的生长情况，并按照不同放大倍数保存照片（建议使用40x、100x和200x的各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，如果未提供照片，默认细胞收到状态良好。

在传代过程中，我们建议一瓶使用原瓶中的完全培养基，另一瓶使用自制的完全培养基，以便进行比较，换液时应将瓶盖松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超出80%汇合度，需将瓶中的完全培养液收集至离心管，保留5ml培养基并放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。若细胞密度已超过80%，则可进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱消化1-2分钟，显微镜下观察细胞变化。若细胞大多数呈现圆形并脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，再将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变化，待其回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化。轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞并加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接存放于-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放至少24小时后再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（请提前佩戴防护面具），快速放入37℃水浴解冻，直至无结晶后，用75%酒精消毒冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。
4. 第二天更换新鲜的完全培养基，继续培养。

四、注意事项

运输过程中，有些细胞由于贴壁不牢可能会发生脱落，这是正常现象。如果发现较多细胞脱落，请将所有培养液收集至离心管中以进行过渡培养，再次消化处理并进行传代。

五、售后条款

在购买尊龙凯时细胞产品后，若遇到以下问题，符合条件可进行重发：

1. 运输过程中的问题，比如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等。
2. 细胞污染，请在收到细胞后48小时内提供实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后或干冰运输的细胞在复苏后24小时内，如大部分细胞未存活，需提供真实的细胞状态照片以进行重发。
4. 如在复苏后24小时内或未开封的情况下出现污染，方可申请重发。
5. 针对细胞活性问题，请于收到产品7天内提供有效的实验结果。

尽量请在收到细胞的当天以及第2、3天拍照留存。若超过三天未反馈则视为产品合格。在4-7天内若出现问题的，同时需提供收到细胞前3天的照片及详尽操作步骤，与技术人员沟通后由其判断责任。

对于客户造成的污染或不当操作导致的细胞问题，将不予重发。请遵循培养指南以确保细胞的健康生长。感谢您选择尊龙凯时，期待为您提供优质的生物细胞产品和服务。