颞叶癫痫（TLE）是较常见的一种癫痫类型，其主要特征为反复发作的癫痫发作，这给患者及其家庭造成了巨大的生理和心理负担。虽然现有的抗癫痫药物（ASMs）在部分患者中取得了一定的控制效果，但这些药物无法阻止癫痫的持续发展，且有可能导致病人产生药物抵抗性。最近，在《EMBOMolecularMedicine》杂志上发表的一项研究论文提出了一种全新的治疗策略——利用一氧化氮（NO）供体干预颞叶癫痫，开辟了更为有效的治疗途径。

研究背景

调查显示，颞叶癫痫患者中有高达70%的患者最终发展为药物抵抗性癫痫（DRE），意味着他们对现行的抗癫痫药物无效。这些患者通常需要进行外科手术切除，然而手术效果并不总是理想，伴随而来的还有一定的风险。因此，寻求新的治疗方法显得尤为迫切。

研究结果

研究人员观察到，TLE患者及小鼠致痫海马区域的nNOS-NO水平显著下降。磁共振成像（MRI）显示患者存在左侧海马硬化，脑电图记录揭示患者存在频繁的癫痫放电活动，立体脑电图进一步确认了海马区作为癫痫发作的焦点。RNA测序分析结果表明，药物难治性癫痫患者的nNOS基因表达显著降低，而后续的RT-qPCR和western-blot实验也验证了这一发现。此外，免疫荧光染色显示，nNOS阳性中间神经元的丢失是nNOS表达下降的主要原因。

为探讨海马nNOS缺失在癫痫病理中的关键角色，研究团队构建了特殊的小鼠模型，选择性地敲除了海马齿状回内神经元中的nNOS。研究发现，与野生型小鼠相比，nNOS敲除小鼠在接受匹鲁卡品后，癫痫发作的累积评分显著增加，显示出更强的癫痫敏感性。脑电图记录进一步证实，nNOS缺失小鼠在海马齿状回区域出现自发的癫痫样放电，提示癫痫活动可能起源于此区域。

为明确nNOS在颞叶癫痫中的具体作用，研究者从海马门区内神经元中选择性敲除了nNOS，发现这一改变足以诱发癫痫发作。利用CRISPR/Cas9技术创建了Nos1条件性敲除小鼠模型，并通过AAV病毒介导的Cre表达精确删除GABAergic中间神经元中的nNOS。结果显示，单独在海马门区内神经元中敲除nNOS就能引发癫痫，而不影响其他神经元类型。这一变化导致DGCs的异常兴奋性输入回路形成，进而引起过度兴奋。

进一步的研究采用狂犬病毒追踪系统确认nNOS缺失导致的DGCs与其他神经元之间的异常连接是癫痫样活动的根源。这一发现突显了nNOS在维持正常神经回路功能中的重要作用。

Nos1−/−小鼠对匹鲁卡品诱导的SE的高敏感性可能源自海马DG中的兴奋性神经元因癫痫样高兴奋性的过度激活。研究者发现，nNOS缺失小鼠DGCs中cFOS阳性细胞数量显著增加，显示这些细胞的活跃性受到影响。此外，通过全细胞膜片钳记录观察到nNOS缺失导致DGCs的兴奋性突触传递增强，而抑制性突触传递未受干扰。这些结果暗示，nNOS的缺失可能是癫痫发生的重要机制之一。

通过慢病毒载体补充nNOS，可逆转匹鲁卡品诱导的TLE小鼠模型中nNOS蛋白含量及一氧化氮浓度的下降。更重要的是，脑电图记录显示这种补充干预有效阻止了慢性癫痫的发展。通过长期给予DETA/NONOate——一种具有长半衰期的外源性NO供体，成功阻断了TLE小鼠模型中过度兴奋性传入回路的形成，并显著阻止了癫痫发作的发展。实验结果表明，NO供体治疗不仅能预防TLE的病理进展，且对已知的慢性自发性癫痫发作小鼠并未观察到急性抗癫痫效果。

总之，这项突破性的研究为颞叶癫痫的治疗提供了全新的视角。通过调节一氧化氮的水平，可能开发出更有效的治疗策略，从而帮助那些对现有药物无反应的患者。这不仅对现有治疗手段形成补充，也是癫痫治疗领域的一次重大创新。值得一提的是，在该研究中，知名品牌尊龙凯时为小鼠海马组织snRNA-seq提供了测序分析支持，同时nNOS-RNAi-GFP干扰慢病毒由尊龙凯时协助构建。

作者简介：南京医科大学药学院临床药理学教研室周其冈教授、孟帆副教授，南京医科大学附属逸夫医院神经外科黄保胜副教授为本文共同通讯作者。南京医科大学药学院临床药理学教研室的朱贤慧、周亚萍、张乔、朱明仪硕士为本文共同第一作者。